1、原理及適用范圍

李斯特菌檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，選擇性試劑，冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU )，李斯特菌檢測板適用于檢測或者計數食品及環境樣品中的李斯特菌菌數。李斯特菌檢測板檢測的李斯特菌包括單核細胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes )，英諾克李斯特菌(Listeria.innocua)，威氏李斯特菌(Listeria.welshi)，但不能區分各種菌。

 

2、操作方法

2.1 食品樣品檢測

2.1.1  食品樣品處理：取樣品25 g(mL)放入裝有225 mL滅菌磷酸鹽緩沖液（或生理鹽水）的取樣罐或均質袋內，制成1:10的樣品勻液。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。 

2.2 環境樣品檢測

2.2.1  環境樣品采集：用無菌的涂抹棒或其他采樣設備收集環境樣品。濕潤采樣設備液體體積≤10 mL。濕潤劑可以為無菌水，滅菌生理鹽水（磷酸鹽緩沖液）或者緩沖蛋白胨水。

2.2.2  環境樣品處理：在收集的環境樣品中添加10 mL 滅菌生理鹽水（或磷酸鹽緩沖液），充分混勻。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。 

2.3 接種：將李斯特菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，靜置10 s左右，待樣品勻液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。

2.4培養：將檢測板疊在一起，倒置于36℃±1℃恒溫培養箱內，培養18～24 h。

 

3、結果判讀

在檢測板上生長的藍綠色點即為李斯特菌陽性點，若檢測板上無菌生長或者長出點為其他顏色點即為李斯特菌陰性。

     

 

4、計數原則及報告方式

4.1  樣品計數

4.1.1 以生長有30～300CFU的檢測板為計數適宜范圍。

4.1.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在計數合適范圍30～300CFU之間，則計算兩個檢測板菌落數的平均值，再除以相應的稀釋倍數，作為每克（毫升）中菌落總數結果。

4.1.3 若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時，按式（1）計算：

                     ∑C

               N= ————————       •••••••••••••••••••（1） 

                   （n1+0.1n2）d

   式中：

   N——樣品中李斯特菌菌落數；

   ∑C——兩個連續稀釋度檢測板（含適宜范圍菌落數的檢測板）李斯特菌落數之和；

   n1——適宜范圍菌落數的第一個稀釋度（低）檢測板個數；

   n2——適宜范圍菌落數的第二個稀釋度（高）檢測板個數；

   d——第一稀釋度的稀釋倍數

 示例：

稀釋度	1:10（第一個稀釋度）	1:100（第二個稀釋度）
菌落數	245，247	31，30

 

              （245+247+31+30）

               N= ————————  =2514

                  （2+0.1×2）×10-1

結果表述為2.5×103CFU/g(mL)。

4.1.4若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長，則以小于1/d（d—最低稀釋倍數）計算。

4.1.5低數值的估算：如果實驗樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋懸液（其他樣品）的兩個檢測板上的菌落數均小于30CFU，計算兩個檢測板上的菌落數的平均數。計算式（2）：

                    ∑C

                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；

∑C——兩個檢測板上菌落數的和；

n——檢測板的數量；

d——樣品初始懸液或實際接種懸液的稀釋倍數。

4.1.6大數值的估算：若所有稀釋度的檢測板上菌落數均大于300CFU，計數最接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數，其他檢測板可記錄為多不可計。結果計算式（3）：

                       ∑C

                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；

∑C——兩個檢測板上菌落數之和；

n——檢測板的數量；

d——與樣品懸液相一致的稀釋倍數。

 

5、結果報告

固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。

 

6、附加說明

    注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。