1、原理及適用范圍

糞鏈球菌普遍存在于水環境中，為條件致病菌，它來源于人和溫血動物的糞便，可以在水中存活很長時間，引起人類疾病。是水體受到糞便污染的重要指標菌，更能客觀的反映水質衛生狀況。中華人民共和國城鎮建設標準在對城市供水、飲用水水質監測中增加了水中糞鏈球菌的檢測指標。糞鏈球菌檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色帶黃暈斑點。本產品適合于生活飲用水、生產加工用水及食品中糞鏈球菌的測定。                 

執行標準：中華人民共和國國家標準《飲用天然礦泉水檢驗方法》（GB/T 8538）；中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準《出口商品中糞鏈球菌群檢驗》（SN/T 0475）。

 

2、操作方法

2.1水樣品檢測

2.1.1 水樣過濾：將滅菌的過濾裝置連接到抽濾瓶上，用滅菌鑷子夾取直徑47 mm～50 mm，孔徑為0.45μm的滅菌濾膜，放在濾器底部，旋緊蓋子，將250 mL水樣注入濾器中抽濾。

2.1.2  揭開檢測板上層膜，在檢測板紙片上加1 mL無菌水濕潤后，迅速用無菌鑷子將過濾水樣的濾膜移放在檢測板紙片上（濾膜截留細菌面向上），濾膜與紙片之間不要夾留著氣泡，貼好上層膜。

2.2食品樣品檢測

2.2.1  取25 g（或25 mL）樣品放入裝有225 mL生理鹽水的均質袋中，以8000 r/min均質1～2 min，制成1:10樣品均液，根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液。

2.2.2 將糞鏈球菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開，用無菌吸管吸取1 mL樣品稀釋液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，靜置10 s左右，待樣品稀釋液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。

2.3 培養：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養箱內，36℃±1℃，培養15～24 h。

 

3、結果判讀

在檢測板（濾膜）上生長的紅色帶黃暈的斑點即為糞鏈球菌陽性，若紙片上的紅色斑點無黃暈則為糞鏈球菌陰性。

 

 

4、計數原則及報告方式

4.1  濾膜過濾水樣：以濾過一張無菌濾膜后產生的菌落數計算，選擇菌落數在20～100CFU的檢測板進行計數后即為250 mL水樣品中所含的菌落總數。結果以CFU/250 mL為單位報告。

4.2 食品樣品計數

4.2.1 以生長有30～300CFU的檢測板為計數適宜范圍。

4.2.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在計數合適范圍30～300CFU之間，則計算兩個檢測板菌落數的平均值，再除以相應的稀釋倍數，作為每克（毫升）中菌落總數結果。

4.2.3 若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時，按式（1）計算：

                        ∑C

               N= ————————     •••••••••••••••••••（1）

                   （n1+0.1n2）d

   式中：

   N——樣品中糞鏈球菌菌落數；

   ∑C——兩個連續稀釋度檢測板（含適宜范圍菌落數的檢測板）糞鏈球菌菌落之和；

   n1——適宜范圍菌落數的第一個稀釋度（低）檢測板個數

   n2——適宜范圍菌落數的第二個稀釋度（高）檢測板個數

   d——第一稀釋度的稀釋倍數

 示例：

稀釋度	1:10（第一個稀釋度）	1:100（第二個稀釋度）
菌落數	245，247	31，30

 

                   （245+247+31+30）

               N= —————————— =2514

                  （2+0.1×2）×10-1

結果表述為2.5×103CFU/g(ml)。

4.2.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長，則以小于1/d（d—最低稀釋倍數）計算。

4.2.5低數值的估算：如果實驗樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋懸液（其他樣品）的兩個檢測板上的菌落數均小于30CFU，計算兩個檢測板上的菌落數的平均數。計算式（2）：

                    ∑C

                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；

∑C——兩個檢測板上菌落數的和；

n——檢測板的數量；

d——樣品初始懸液或實際接種懸液的稀釋倍數。

4.2.6大數值的估算：若所有稀釋度的檢測板上菌落數均大于300CFU，計數最接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數，其他檢測板可記錄為多不可計。結果計算式（3）：

                        ∑C

                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值；

∑C——兩個檢測板上菌落數之和；

n——檢測板的數量；

d——與樣品懸液相一致的稀釋倍數。

 

5、結果報告

固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。

 

6、附加說明

    注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。